Virološki studije. Crijevne bolesti. (Dio 3)

Sve od prvih skupova su na temelju „sendvič” načelu, kasnije koristio „tandem” -version. U procesu izgradnje seta napravio razne poboljšanja na oba izvještaja o EIA i obradu uzoraka i puferski sustavi primjenjuju. Na primjer, neki autori preporučuju korištenje EDTA ukloniti vanjski kapsidni ljuske, koja otkrije grupu ovojnice antigene unutarnje. Drugi je predložio uzoraka za obradu Eagle MEM s 0,5% mliječne bjelančevine hidrolizata i antibiotika omogućuje korištenje tih ekstrakata za otkrivanje virusa u kulturi tkiva i TEM, što ga čini moguće koristiti jedan te isti uzorak u različitim metodama istraživanja. Vrlo je važno tampon za srednje ispiranje. Većina ovih pufera sadržava fiziološku otopinu s niskim koncentracija detergenta, Tween 20 (BRYDEN A. S., 1990). Svi setovi uključuju pozitivne i negativne kontrole. Kao negativna kontrola može se koristiti kao puferi i posebne negativnom serumu. Kao pozitivne kontrole testiran pozitivno serum koristi. Treba ipak napomenuti da je interpretacija rezultata varira od testa do testa. Primarna mjera kompleta je minimalna reaktivan ili «cut-off», koja se obično koristi za određivanje pozitivan rezultat i razlika u razini između negativnog kontrola i pozitivna razini, tako idealno, optička gustoća (OD) negativna kontrola bi trebala biti <0,1. Однако на практике этот показатель колеблется у различных тестов. Что касается положительного результата, то он может быть достоверен в подавляющем большинстве случаев при показателях ОД > 0,5, т. е. в несколько раз превышает ОД негативного контроля. В то же время небольшая часть образцов слабо реагирует с ОД между «cut-off» и 0,5. Многие из них могут быть отрицательны в ПЭМ, но большая часть — положительна при ЭФ в ПААГ, ПЦР. Эти моменты необходимо принимать во внимание при проведении и учете ИФА.

Zbog velikog broja komercijalnih sustava za ispitivanje bilo je čitav niz radova posvećenih određivanje njihove relativne efikasnosti.

Valja napomenuti da su prvi komercijalni sustavi za ispitivanje su daleko od savršenih osjetljivosti i specifičnosti indeksa. Dakle, Gibchrist M. i sur. (1987), na materijal od 136 pacijenata su identificirane ove brojeve za 4 ELISA test sustava: rotavirus EIA, Pathfinder, rotavirus Bioenzabead i Rotenzyme II, što je jednako 91%, 98%, 80%, 84% i 100%, 78%, 95 %, 88 / a, pojedinačno. Objavi nisku specifičnost testa sustava i tragača Rotazyme II, potonji je dao lažno pozitivne rezultate, a prema drugim autorima.

Kako bi se poboljšala specifičnost sustava za ispitivanje, znanstvenici su počeli koristiti monoklonskih antitijela. Ta ispitivanja poliklonska i monoklonska antitijela su pokazala prednost potonjeg. Autori grupa određuje efikasnost dva indikatora dijagnostički test sustava na temelju monoklonskih protutijela (Rotaclone, Pathfinder), i sustava na temelju tri poliklonskih antitijela (EIA rotavirus, Rotazyme II Wellcozyme rotavirus Dennehy P. et al., 1998). U proučavanju uzoraka stolice s 100 pacijenata s gastroenteritisa testirani u EF PAGE, pokazano je da su i sustavi za ispitivanje temelji se na monoklonska antitijela se razlikuju maksimalne (100%) osjetljivost. Osjetljivost poliklonalnih sustava za ispitivanje više od 90% sa fluktuacijama specifičnosti u rasponu od 55 do 100% (Dennehy R. et al., 1988).

Flewett T. et al. (1989) na materijale iz 1163 djece (u Vol. H. 66 dojenčadi) u odnosu dijagnostička učinkovitost ispitnog sustava Dekopatts tvrtki i standard koji test sustava. Osjetljivost i specifičnost su Dekopatts jednaka 97% u odnosu na koji test sustava. Osim toga, u proučavanju materijala iz ovih brojki ispitivanja novorođenčadi test sustava su 100% i 98% respektivno.

Usporedna procjena ostalih ELISA sustava za ispitivanje: Rotascreen, Wellcozyme, Rotazyme II i IDEIA pokazala da samo Rotascreen i IDEIA imao specifičnost i osjetljivost veće od 90% (Molyneaux R. J. et al ,. 1989).

U vezi s podacima o specifičnosti ELISA lag od svojih pokušaja da se poboljša osjetljivosti metode su napravljene da su se popravili ove parametre. Usporedno istraživanje osjetljivosti, specifičnosti i slučajnost pozitivnih i negativnih rezultata komercijalnim kitovima VIDAS rotavirus, Rotaclone Pathfinder i pod kontrolom PEM u proučavanju 464 kopromaterialov pokazala izuzetne rezultate: VIDAS rotavirusa 98- 99,3, 98,7 i 99% - Rotaclone - 100 - 98 i 99- 100- Pathfinderu - 100- 92,4- 87,3% i 100 (Dennehy R. N. et al, 1994). Kao što se može vidjeti iz gore navedenih podataka, komercijalni testovi trudnoće kvalitativni parametri su postali toliko visoka da je broj istraživača (kao što se čini da nas je malo prerano) predlaže se koristiti kao referentni standard ELISA kit Rotaclone, Cambridge Biosci. Corp (Dennehy P. H. et al., 1990). Međutim, nema više oprezan pogled autora, za apsolutno točne podatke, zajedno s IFA i koristiti druge metode istraživanja. TEM, PCR, EF-stranici (Donneli G. i sur, 1993- Husain M. et al, 1995.-Markowsca-. daniel J. i sur., 1996. Buesa G. i sur., 1996. Dennehy PH et al., 1994. do Jiang B. et al., 1995). Unatoč napretku u razvoju ELISA sustava za ispitivanje, kako bi ih poboljšati istraživanja u tijeku. Dakle, Ribas-Antunez M. i sur. (1998) proveli usporednu procjenu ELISA licu i EF-stranicu u anketi od 100 kopromaterialov uzoraka. Autori visoke osjetljivosti, specifičnosti i sporazum o rezultatima tih metoda je pokazao.

Uz primjenu komercijalnih testa sustava uspješnog pokušaja da se razvije laboratorij ELISA opremom su se u nekoliko autora (Ruggeri F. et al., 1992.-Husain M. et al., 1995.-Buesa J. et al., 1996). Autorska prava laboratorijska ispitivanja o osnovnim parametrima nisu inferiorni u odnosu na komercijalne sustave za ispitivanje. Dakle, skup je osmišljen od strane indijskog Nacionalnog instituta za virologiju (Pune) za dijagnoza infekcije rotavirusom (NIV), koji je u usporedbi s komercijalnim set Dekopatts (Kelkar S. D., 1993). U postupku nadzora 63 paralelnih uzoraka se da JB je otkrio 36 zaraženih osoba (57%), Dekopatts - 33 (52%), na 100% specifičnosti. Međutim, troškovi laboratorijske lijeka bila je znatno niža od ostalih komercijalnih kompleta dozvoljeno da autori predložiti korištenje NIV u zemljama u razvoju.

U našoj zemlji je također pokrenula proizvodnju domaćih poslovnih testovima za IFA: "Rotapast" (St. Petersburg), "Rota antigen" (Nižnji Novgorod), "Roth-analiza" (Ekaterinburg). Osjetljivost i specifičnost tih skupova, nažalost, daje slične rezultate i strani agenti je 75%, uz poklapanje pozitivnih rezultata - 90%, negativni rezultati - 86% (Karpovitch A. G. i sur., 1991). U isto vrijeme u brojnim laboratorijima razvijaju i testiraju svoje ELISA test sustave za dijagnosticiranje rotavirusa: Bukrin AG, Vasiliev 1988- BJ et al, 1989- Ramishvili Lee L., i sur., 1991. - Dzyublik IV i suradnici, 1990 Nosatenko AI et al, 1991) ...

Dakle, visoka osjetljivost i specifičnost, brzina i sposobnost na rezultate istraživanja računovodstvene automatski osigurati ELISA prioritet među ostalim laboratorijskim dijagnostičkim metodama rotavirusa. Treba napomenuti da je IFA se koristi ne samo za otkrivanje antigena, ali i za tipizaciju virusa detekcija. Takav širok raspon mogućnosti metode čini neizostavni u svakom laboratoriju.

Sedimentne sve dijagnostički testovi obuhvaćaju reakciju na temelju čestica aglutinacijske (eritrociti, lateks, bakterije) senzitiziranih antigena ili antitijela, koji su sposobni da agregiraju u nazočnosti seruma i homolognih antigena. Čestice služe kao nosači za specifične determinante, združivanja koja se javlja kao posljedica reakcije antigen-antitijelo, koja se vizualno zabilježio prisutnosti i prirodi taloga dobivenog. Prema tome, primjena nanosa testa može detektirati kao antigena i antitijela.

Reakcija hemaglutinacijskim (RHA) temelji se na sposobnosti humanih crvenih krvnih stanica, i razne vrste životinja i ptica aglutinacija ljudski rotavirus i životinje. Ova reakcija se koristi u početnim fazama studije i dijagnosticiranje infekcije rotavirusom (Drozdov., Et al., 1982). Novije studije su pokazale da nisu svi sojevi rotavirus mogućnosti aglutinacija eritrocita (Ezeqiel M. et al., 1995). U tom pogledu, dijagnostička vrijednost ove metode je upitna i trenutno RGA gotovo nikada ne koriste. U isto vrijeme, postoje izvješća o korištenju hemaglutinacije reakcije u istraživački prirodi istraživanja u vezi utvrđivanja sposobnosti ljudskih i životinjskih rotavirus slijepiti eritrociti različitih skupina, kao i studija o uvjetima pod kojima se nalazi i hemaglutinacijsko (Devitt SM, 1993). Najnoviji radovi posvećeni pojedine ekspresije gena odgovornih za hemaglutinacijskim i aminokiselinskih sekvenci kodiranja za ovu sposobnost. Kao posljedica toga, on je uspio u uspostavljanju hemaglutinacije domene nalazi između 93 i 203 (AA VP4 Crawford S. et al., 1994. do Ezeqiel M. et al., 1995).

Reakcija posrednog ili pasivnog hemaglutinacijskim (PHA ili RIGA) vrlo često koriste u laboratorijskoj praksi (osobito u malom laboratoriju), ako je potrebno, pregledati velik broj slučajeva i brze rezultate (Kravchenko T. M. i sur., 1991 Zarubinsky Vy , kapa S.A., 1989- Zakirova S. F. i sur., 1990 J. Vasil'ev et al., 1987- 1989- Kirin VN et al., 1991 i W. A. ​​Abenova et al., 1991).

Razliku RSA, RIGA koristi u eritrocitima, osjetljivi rotavirus antigen. Tradicionalni objekt za senzibilizaciju ljudska crvena krvna zrnca, ovce i perad pilići -, purani, patke. Priprema se od eritrocita priprema ptice nastanjuju brže, čime se smanjuje vrijeme analize bez gubitka reakcije osjetljivosti. Postupak pričvršćivanja antitijela za eritrocite se provodi pomoću raznim reagensima, od kojih su najčešći razvijač za fotografije i VDV (bidiazotirovanny benzidin). Osim toga, upotreba imunoglobulina u senzibilizacije eritrocita poboljšana učinkovitost dijagnostičkog lijeka (Chubov N. B. i sur., 1991). U našim istraživanjima, RIGA obavlja eritrocita diagnosticum tehnikom razvila u Sverdlovsk Nieve.

Određivanje rezultati rotavirusa na kopromaterialah pokazali da RIGA osjetljivost od 72% u odnosu na 86% u ELISA i podudarnost rezultata pod kontrolom TEM i migracije je 100% (Vasil'yev B. J. et al., 1989). RIGA usporedbom rezultata sa TEM i RSK VIEF pronađena je vrijednost viša osjetljivost Rigi (Tamendarova N. C. et al., 1989). Slične podatke o materijalima, a od 866 djece je podnijet zahtjev Rigi, TEM i IEM (Zarubinsky Vy, kapa S. A., 1989). Utvrđeno je da je osjetljivost ekvivalent RIGA TEM i slučajnost između tih metoda je iznosio 96,6%. Slične rezultate kasnije Abenova W. A., dobiva i sur su. (1961). Ispitni 1458 kopromaterialov djece u bolnici sa RV infekcije Riga, DGC i TEM otkrila VIEF RV antigen 35,8- 26,2- 18,2 i 39,8% uzoraka, respektivno. Prema tome, RIGA nastavlja primjenjivati ​​u laboratorijskoj dijagnostici, ali nedostatak stabilne za skladištenje komercijalne eritrocita pripremama otežava široko koristiti za otkrivanje rotavirusa antigena u bolesnika materijala. S izravnom PHA u laboratoriju pomoću obrnutog postupka TPHA koristi za određivanje RV u staničnoj kulturi i kopromaterialah i trenutno (Tokieda M. et al., 1996. Kuzuya M. et al., 1998).